Comparación de tres tratamientos para la crioconservación de serovares de Leptospira en nitrógeno líquido
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Publicado Jan 9, 2009
La preservación de bacterias pertenecientes al género Leptospira por métodos tradicionales -repiques frecuentes del cultivo- es costosa, dispendiosa y puede generar pérdidas de las características genéticas del cultivo. En el presente estudio se estandarizó una técnica de crioconservación en nitrógeno líquido para seis serovares de Leptospira -Pomona, Hardjoprajitno, Canicola, Icterohaemorrhagiae, Grippotyphosa y Bratislava-, usando como agente crioprotector el dimetil sulfóxido (DMSO) a una concentración final de 2% y una tasa de enfriamiento de 1°C/min y se comparó con el uso de glicerol a concentraciones finales de 0,2% y 10%. Los tres métodos se evaluaron mediante la determinación de la viabilidad bacteriana antes y después de la congelación (a 0, 30, 90, 180, 270 y 360 días) por recuento bacteriano en cámara. Los datos se sometieron a análisis de varianza y comparación por parejas usando la prueba de Bonferroni. La presencia de glicerol al 10% (concentración final) en el medio crioconservante disminuyó la viabilidad de los serovares. La técnica de criopreservación en nitrógeno líquido con DMSO al 2% y glicerol al 0,2% (concentraciones finales) permitió la exitosa conservación de los seis serovares de Leptospira. El método de criopreservación aseguró una alta viabilidad, lo que disminuyó costos y tiempo en su ejecución y demostró ser un mejor método de conservación a largo plazo en relación con el mantenimiento tradicional por subcultivos periódicos.
Bajaj Y. 1995. Capítulo 1: Cryopreservation of plant cell, Tissue, and organ culture for the conservation of Germplasm and Biodiversity. En Bajaj YPS (ed.) Biotechnology in Agriculture and Forestry. Vol 32. Berlin, Springer-Verlag, p. 3-18.
Bharti A, Nallu J, Ricaldi J, Matthias M, Diaz M, Lovett M, Levett P, Gilman R, Willig M, Gotuzzo E, Vinetz J. 2003. Leptospirosis: a zoonotic disease of global importance. The Lancet Infections Disease 3(12): 757-71.
Bomfim M, Barbosa-Stancioli E, Cota M. 2007. Detection of pathogenic leptospires in urine from naturally infected cattle by nested PCR. The Veterinary Journal, 178(2):251- 256.
Borrero R, González A, Sardiñas C, Batista N, Valdés Y. 2006. Conservación de cepas vacunales de Leptospira a -70°C. Revista Cubana de Medicina Tropical; 58(1):50-55.
Coghlan D. 1967. Low- temperature preservation of Leptospira, preliminary communication. J.Hyg. (65):373-379.
Donev T. 2002. A possibility for cryoconservation of microbiological specimens in minicryotubes. Journal of Culture Collections (3): 93-94.
Dumont F, Marechal P, Gervais P. 2004. Cell size and water permeability as determining factors for cell viability after freezing at different cooling rates. Appl Environ Microbiol 70(1): 268-72.
Fahy G. 1986. The relevance of cryoprotectant “Toxicity” to cryobiology. Cryobiology (23): 1-12.
Faine B, Adler C, Bolin A, Perolat P. 1999. Leptospira and Leptospirosis. 2nd Edition, Melbourne, MediSci, 272 p.
Gallego-Beltran JF. 2002. Leptospirosis in Colombian dairy cattle: Microbiological, Serological and molecular aspects of the disease (tesis doctoral), Londres, University of London, The Royal Veterinary College.
Heckly R. 1978. Preservation of Microorganisms. Advances in Applied Microbiology. 24: 19- 53.
Hubalek Z. 2003. Protectants used in the cryopreservation of microorganisms. Cryobiology 46:205–29.
Levett P. 2001. Leptospirosis. Clinical Microbiology Reviews, 14 (2): 296–326.
Levett P. 2003. Usefulness of serologic analysis as a predictor of the infecting serovar in patients with severe leptospirosis. Clinical Infections Disease 36(4): 447-52.
Linscott D, Boack A. 1960. Protective action of Glicerol in the Freezing of Leptospirae. Applied Microbiol (80):573-574.
Mazur P. 1970. Cryobiology: The Freezing of Biological System. Science 168: 939-49.
Mazur P. 1984. Freezing of living cells: Mechanisms and implications. American Journal of Physiology, (247): 125-42.
Meiwan P. 2007. Epidemiology of infection with Leptospira species in livestock in Papua New Guinea (tesis doctoral). Perth, Australia, The School of Biomedical and Veterinary Sciences Murdoch University.
Myers M. 1985. Manual of Laboratory Methods for the Diagnosis of Leptospirosis. Technical Note No. 30. Buenos Aires, Pan American Zoonoses Center. 46 p.
Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). 2008. Leptospirosis. En Capítulo 1.1.9. Manual of diagnostic test and vaccines for terrestrial animals. 251p.
Palit A, Haylock L, Cox JC. 1986. Storage of pathogenic leptospire in liquid nitrogen. Journal of Applied Bacteriology (61): 407-11.
Reed N, Goddard R, Wyeth P. 2000. The Maintenance of Challenge Strains Used in the Potency Test for Canine Leptospira Vaccines. Biologicals (28):25-8.
Shung-Chang Jong. 1989. Capítulo 13: Biotic diversity and Germplasm preservation, global imperatives. En Knutson L, Stonner A (eds.). Beltsville Symposia in Agricultural Research, Netherlands, Kluwer Academic Publishers, pp 241-271.
Simione F. 1998. Cryopreservation Manual Nalgene Nunc International. En: Nalgene labware, http://www.nalgenelabware.com/ techdata/technical/cryo.pdf 15 p. consulta: noviembre 2007.
Stalheim O. 1971. Viable, A virulent Leptospira interrogans Serotype Pomona Vaccine: Preservation in Liquid Nitrogen. Applied Microbiology 22(4): 726-27.
Turner L. 1970. Leptospirosis III: Mantenimiento, aislamiento y demostración de Leptospiras. Artículo especial. Transactions of the Royal Society of Tropical Medicine and Hygiene 64(4): 623-46.
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